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Viromer® Transfection of siRNA, mRNA and plasmids
 
Viromer® 
Reactivos para Transfección
 
 
miRNA / siRNA transfection:
   Viromer® BLUE and  GREEN
 

 mRNA / plasmid transfection:
    – Viromer® RED  and YELLOW 

 

¿Cómo funciona la tecnología Viromer®? En el siguiente vídeo les enseñamos el mecanismo que facilita la transfección incluso en células difíciles de transfectar como son macrófagos y monocitos. No duden ponerse en contacto con nosotros para cualquier duda o pregunta o pedir muestras gratuitas.

VIDEO INFORMATIVO:

Si no funciona el enlace haga click aquí.

Código de Productos para Pedidos:

Nombre de producto Código Incl. Buffer Vol-µl Reacciones  
Viromer® BLUE - 50 transfections VB-01LB-00 Buffer BLUE 10ml 50 50 in 24-well
Viromer® BLUE - 500 transfections VB-01LB-01 Buffer BLUE 50ml 500 500 in 24-well
Viromer® BLUE - 3X500 transfections VB-01LB-03 Buffer BLUE 3x50ml 1500 1500 in 24-well
Viromer® BLUE - GAPDH/Cy3 siRNA controls VB-siBUNDLE-01 Buffer BLUE 1ml 150 3 in 24-well
           
Viromer® GREEN - 50 transfections VG-01LB-00 Buffer GREEN 10ml 50 50 in 24-well
Viromer® GREEN - 500 transfections VG-01LB-01 Buffer GREEN 50ml 500 500 in 24-well
Viromer® GREEN - 3X500 transfections VG-01LB-03 Buffer GREEN 3x50ml 1500 1500 in 24-well
           
           
Viromer® YELLOW - 50 transfections VY-01LB-00 Buffer YELLOW 10ml 50 50 in 24-well
Viromer® YELLOW - 600 transfections VY-01LB-01 Buffer YELLOW 50ml 600 600 in 24-well
Viromer® YELLOW - 3X600 transfections VY-01LB-03 Buffer YELLOW 3x50ml 1800 1800 in 24-well
Viromer® YELLOW - GAPDH/Cy3 siRNA controls VY-BUNDLE-01 Buffer YELLOW 1ml 150 3 in 24-well
           
           
Viromer® RED - 50 transfections VR-01LB-00 Buffer RED 10ml 50 50 in 24-well
Viromer® RED - 600 transfections VR-01LB-01 Buffer RED 50ml 600 600 in 24-well
Viromer® RED - 3X600 transfections VR-01LB-03 Buffer RED 3x50ml 1800 1800 in 24-well
Viromer® RED - pDNA-/mRNA-GFP controls VR-BUNDLE-01 Buffer RED 1ml 150 3 in 24-well
 
 

 

¿Qué es Viromer?

Al contrario de lo que pueda indicar su nombre, Viromer, es un producto puramente sintético. Está basado en una novedosa tecnología para desarrollar polímeros inspirados en el virus de la gripe y su gran capacidad de propagación en las células.

¿Qué es lo que hace tan interesante la infección del virus de la gripe?

El virus de la gripe infecta células epiteliales a través de endocitosis guiada por receptor liberando su contenido genético gracias a un proceso de fusión de membranas. Este mecanismo está relacionado con una glicoproteína que se expresa en la superficie del virus llamada hemaglutinina. En concreto, mediante un péptido denominado péptido de fusión, el cual es extremadamente sensible a descensos de pH (acidificación) que ocurre durante el proceso de endocitosis. El mecanismo se basa en la protonación de aminoácidos de naturaleza ácida como es el glutamato, GLU, los cuales son equilibrados por aminoácidos de naturaleza hidrofóbica o básica como son las alaninas, ALA. A nivel proteico, el cambio de hidrofobicidad inicia la fusión de la membrana viral con la membrana del endosoma, permitiendo la liberación del genoma del virus (ARN) dentro del citosol celular y la posterior utilización de toda la maquinaria celular para la replicación viral.

¿Cómo reproduce Viromer este mecanismo viral?

En Lipocalyx han desarrollado una copia funcional de este péptido de fusión basado en alta tecnología química de polímeros. El esqueleto de la estructura es una rama de una molécula llamada, Polietilenimina o PEI (de < 200KDa) capaz de unirse directamente a los ácidos nucleicos con carga negativa. Por sí sola, la PEI es conocida por ser uno de los primeros agentes de transfección y aún es usada en muchas aplicaciones. Sin embargo, hay que tener en cuenta que la PEI produce cierta toxicidad y que, debido a que presenta una carga global positiva, no es compatible con los sueros y antibióticos que se utilizan en los medios de cultivos celulares.

En detalle, el esqueleto de PEI que constituye el Viromer contiene numerosas sustituciones en las cadenas secundarias de grupos alquilos y carboxilos (más o menos grandes y ramificados), haciendo que la estructura final sea muy diferente a la de una PEI típica. Las cadenas carboxiladas (ácidos grasos) serían las regiones homólogas a los aminoácidos GLU en el péptido de fusión del virus de la gripe, reproduciendo así la sensibilidad a cambios de pH (descenso de pH, acidificación). Por otro lado, las cadenas alquilo serían similares a los grupos ALA del péptido de fusión del virus, que otorga hidrofobicidad, permitiendo así la fusión de las membranas de fosfolípidos (entre endosoma y membrana viral, en el caso del virus de la gripe). Finalmente varias de las estructuras descritas anteriormente se entrelazan y envuelven el DNA/mRNA/siRNA dando lugar a un complejo molecular denominado complejo de transfección. Después de que estos complejos se hayan formado e introducido en su interior vía endocitosis, el incremento de la acidificación en los endosomas tardíos provocará el cambio estructural en el complejo de transfección que culminará en la fusión de membranas que liberará el ácido nucleico del interior del endosoma hacia el citosol celular, de la misma manera que hace el virus de la gripe.

¿Cuál es la diferencia entre los 4 Viromers?

Todos los productos Viromer están formulados con una estructura global general, es decir, un esqueleto de una PEI con diferentes sustituciones en cadenas secundarias carboxiladas o alquiladas. La diferencia entre estos cuatro productos recae en la longitud y en el número de ramificaciones de las cadenas de carbono, que formarán los complejos de transfección (de mayor o menor tamaño). Este último punto, el tamaño del complejo de transfección, parece inducir preferencia dependiendo de la línea celular. Lipocalyx ha estudiado más de 20.000 estructuras, y finalmente se seleccionaron aquellas 4 más adecuadas a las necesidades y requerimientos para la transfección celular.

Viromer® BLUE y GREEN:

Estos dos Viromers han sido diseñados para transfección con siRNA, es decir, para conseguir silenciamiento génico. El Viromer BLUE es un agente más versátil mientras que con el Viromer GREEN se obtiene un mejor resultado para algunas células específicas como son células del sistema inmune).

Viromer® RED y YELLOW:

Estos dos Viromers han sido diseñados para la transfección de plásmido, shRNA y mRNA (sobre-expresión de proteínas). De nuevo, el Viromer RED es la primera opción mientras que el Viromer YELLOW es más específico dando una mayor eficiencia de transfección en ciertas células como son cardiomiocitos y fibroblastos primarios.

¿Cuáles son las principales características de Viromer?

Los complejos de transfección que se forman con los productos Viromer, son prácticamente neutros en su carga total, lo que permite su uso sin ningún problema con los antibióticos y sueros que hay en los medios de cultivo celular.

Por otro lado, después del desensamblaje del ácido nucleico del Viromer en el endosoma tardío, el Viromer es eliminado vía exocitosis, sin provocar una excesiva toxicidad para las células. Por supuesto, no hay que olvidar que cualquier método de transfección es un proceso de estrés celular. Sin embargo, Viromer ha demostrado que estos efectos secundarios de toxicidad son menores que con otros agentes de la competencia como son los agentes basados en lípidos.

Son especialmente remarcables los buenos resultados en células complicadas de transfectar, como son células primarias, cardiomicitos, neuronas, o MEFs.

Además, el protocolo de uso de Viromer es muy sencillo y fácil de optimizar en los laboratorios acostumbrados al manejo de estas técnicas celulares.

¿Por qué Viromer es superior a los agentes de transfección lipídicos?

La filosofía de Lipocalyx no es transmitir que los productos Viromer sean estrictamente mejores o superiores a las famosas Lipofectaminas o derivados, en cuanto a la eficiencia de transfección obtenida. La diferencia aparecerá en cada caso, sobre todo en aquellas líneas celulares con ciertas dificultades para ser transfectadas, requiriendo un menor volumen de agente de transfección y/o ácido nucleico, reduciendo la toxicidad….

Un punto muy interesante es que los agentes de transfección basados en polímeros tienen la gran ventaja de no interferir con la fisiología celular, mientras que aquellos cuya naturaleza es lipídica, pueden inducir efectos en experimentos posteriores que se vayan a realizar (incluso cuando haya ido bien la transfección).

¿Cuáles son las limitaciones de trabajar con Viromer?

Es bien conocido que no todas las líneas celulares son transfectables con una alta eficiencia. De hecho, en la mayoría de los casos los resultados que no son totalmente satisfactorios se culpa al agente de transfección sin tener en cuenta otras importantes variables.

Una de las primeras limitaciones es que la línea celular con la que vayamos a trabajar tenga actividad endocítica (no todas las líneas celulares realizan endocitosis) o incluso si la tienen, que sea a un nivel bajo. Además, incluso cuando la actividad endocítica es limitada pero se ha podido introducir el material genético en las células, el plásmido o el siRNA deben llegar hasta el núcleo celular, siendo este proceso extremadamente limitado en aquellas células que no se dividen o se dividen a una tasa de proliferación muy baja.

Por otro lado, no sólo el tipo de línea celular sino también en el estado fisiológico de la población celular es un factor importante. La pureza, tamaño e integridad del ácido nucleico con el que se vaya a trabajar, también son datos a tener en cuenta para que los resultados sean los adecuados. Además, siempre hay que contar también con controles positivos y negativos para valorar completamente el experimento.


 ** Para más información, puede bajarse (ver más abajo) el catálogo comercial y la base de datos celular (Cell DataBase) en formato PDF 

**Por favor consulte con nuestro departamento comercial 

 

     Información adicional del producto
     Viromer BLUE
     Viromer GREEN
     Viromer YELLOW
     Viromer RED
     Cantidad:

     Archivos Adjuntos :
Viromer Lipocalyx -Catálogo del Fabricante (EN)
Cell database - Base de datos celular



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